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武漢愛基百客生物科技有限公司(簡稱愛基百客),位于武漢高農(nóng)生物園,辦公面積逾3000平方米,是一家專注于表觀組學(xué)、單細胞時空組學(xué)和高通量測序分析服務(wù)的新型生物科技企業(yè)。


公司旨在為客戶提供專業(yè)的科研服務(wù),運營至今合作的科研客戶近千家,涵蓋國內(nèi)知名科研院所、高校以及相關(guān)生物企業(yè),運營至今銷售額超1億元,科研成果曾多次在Science、Cancer Cell、Plant Cell、Nature Communications、J HEMATOL ONCOL等國際高水平學(xué)術(shù)期刊發(fā)表,受到了客戶廣泛好評,是國內(nèi)成長最迅速的多組學(xué)科研服務(wù)企業(yè)之一。

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科技服務(wù)

详细说明

RIP-seq

  • 產(chǎn)品介紹
  • 案例分析

RIP-seq(RNA Immunoprecipitation sequencing)


產(chǎn)品介紹

RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)是研究細胞內(nèi)RNA與蛋⽩結(jié)合情況的技術(shù),RIP利⽤⽬標(biāo)蛋⽩的抗體將相應(yīng)的RNA-蛋⽩復(fù)合物(RBP)沉淀下來,分離純化捕獲的RNA,結(jié)合⾼通量測序技術(shù)對⽬標(biāo)RNA 進⾏測序分析。RIP可以看成是普遍使⽤的染⾊質(zhì)免疫沉淀 ChIP 技術(shù)的類似應(yīng)⽤,蛋⽩結(jié)合對象為RNA,RIP-seq即對富集得到的RNA ⽚段進⾏⾼通量測序,是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控⽹絡(luò)動態(tài)過程的有⼒⼯具,能夠有效探究在基因組范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)與蛋⽩或蛋⽩復(fù)合物相結(jié)合的RNA。

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圖:RIP-seq實驗流程


技術(shù)路線:

RIP技術(shù)路線.png


樣本要求:

細胞:1×107 

動物組織:5 g

植物組織5 g

真核微生物:500mg


建庫測序:

測序策略:NovaSeq6000, PE150

測序深度:6-12 G


項目周期:

45個工作日


案例分析

【項⽬⽂章】《hnRNPU是小鼠精原干細胞庫建立所必需的》

hnRNPU is required for spermatogonial stem cell pool establishment in mice

期刊:Cell Reports|影響因⼦:6.9|發(fā)表時間:2024年|發(fā)表單位:華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院


研究背景:

精原干細胞(SSCs)是負責(zé)精子發(fā)生的干細胞,具有自我更新和分化產(chǎn)生功能性精子的能力。SSCs的持續(xù)再生對于維持雄性生育力至關(guān)重要。然而,SSC池的發(fā)育起源尚不清楚。在哺乳動物中,SSCs源自名為 prospermatogonia(ProSG)的前精原細胞,依次發(fā)育為增殖型前精原細胞(M-ProSG)、初級過渡型前精原細胞(T1-ProSG)和次級過渡型前精原細胞(T2-ProSG)三種類型。ProSG的遷移和分化過程對于SSC池的建立至關(guān)重要,但這一過程的調(diào)控機制仍不完全清楚。


研究結(jié)果:

  在此,我們證實了 hnRNPU 對于精原干細胞(SSC)庫的建立至關(guān)重要。在雄性小鼠中,前精原細胞(ProSG)中 hnRNPU 的條件性缺失會導(dǎo)致精子發(fā)生停滯并引致不育。hnRNPU 缺陷型前精原細胞無法分化并遷移至基底膜,從而無法在幼年期建立 SSC 庫。此外,hnRNPU 的缺失導(dǎo)致前精原細胞積聚,并破壞了 T1 型前精原細胞向 T2 型前精原細胞的轉(zhuǎn)變過程。單細胞轉(zhuǎn)錄組分析顯示,生殖細胞處于有絲分裂靜止?fàn)顟B(tài),并且在 hnRNPU 耗竭后喪失了其獨特的身份特征。我們進一步表明,hnRNPU 能夠結(jié)合 Vrk1、Slx4 和 Dazl 的轉(zhuǎn)錄本,這些轉(zhuǎn)錄本已被發(fā)現(xiàn)在 hnRNPU 缺陷的睪丸中存在異常的選擇性剪接。這些觀察結(jié)果為 SSC 庫的建立提供了重要見解,并可能對男性生育能力具有轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)意義。



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圖:hnRNPU結(jié)合pre-mRNA并與RNA結(jié)合蛋白相互作用



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