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真核轉(zhuǎn)錄組（RNA-seq）
產(chǎn)品介紹： 轉(zhuǎn)錄組，廣義上指某一生理條件下，細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的集合，包括mRNA、rRNA、tRNA以及其他非編碼RNA，狹義上的轉(zhuǎn)錄組指的是所有mRNA的集合。目前轉(zhuǎn)錄組檢測的是所有mRNA集合。 轉(zhuǎn)錄組測序指利用新一代高通量測序技術(shù)，全面快速獲取某一物種特定組織或器官在某一狀態(tài)下的所有mRNA的序列信息。 分析流程：
樣本要求： 細胞：≥1×106個 動物組織：≥1g 植物組織：≥3 g 真核微生物：≥300mg/106 建庫測序： 測序策略：PE150 測序深度：6 G 項目周期： 45個工作日
案例分享 【項⽬⽂章】《G9a-TRIM21軸通過誘導(dǎo)FoxO3a發(fā)生甲基化依賴性泛素化和降解，進而促進氧化應(yīng)激和細胞焦亡，從而加劇糖尿病腎缺血再灌注損傷》 The G9a-TRIM21 axis exacerbates diabetic renal ischemia-reperfusion injury by inducing methylation-dependent ubiquitination and degradation of FoxO3a to promote oxidative stress and pyroptosis 期刊：Redox Biology｜影響因⼦：11.9｜發(fā)表時間：2025年｜發(fā)表單位：武漢大學(xué)人民醫(yī)院 研究背景： 糖尿病腎缺血再灌注損傷（RIRI）是一種嚴重的手術(shù)并發(fā)癥，在糖尿病患者中預(yù)后尤為不良。組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a已牽涉于多種病理過程，但其在糖尿病RIRI中的作用尚不清楚。新興證據(jù)表明，非組蛋白甲基化可能在細胞應(yīng)對缺血性損傷的反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究旨在探討G9a在糖尿病RIRI中的功能性作用并闡明其分子機制，特別關(guān)注其對FoxO3a穩(wěn)定性、氧化應(yīng)激和細胞焦亡的調(diào)控。 研究結(jié)果： 研究在高糖條件下利用G9a條件性敲除小鼠和HK-2細胞建立了糖尿病RIRI模型。通過檢測血清肌酐和尿素氮（BUN）評估腎功能。進行了組織病理學(xué)評估和分子分析，以檢測組織損傷和焦亡標(biāo)志物。機制研究包括利用質(zhì)譜鑒定G9a相互作用蛋白，利用免疫共沉淀驗證蛋白相互作用，以及利用泛素化實驗表征翻譯后修飾。采用定點突變技術(shù)鑒定FoxO3a調(diào)控中的關(guān)鍵殘基。在糖尿病RIRI模型中，G9a表達顯著上調(diào)。在體內(nèi)和體外模型中，G9a的基因敲除均減輕了腎損傷，并降低了氧化應(yīng)激和細胞焦亡。機制上，G9a直接與FoxO3a相互作用并在賴氨酸262位點對其進行甲基化，這促進了E3泛素連接酶TRIM21對FoxO3a的識別。隨后，TRIM21介導(dǎo)了FoxO3a在賴氨酸176位點的K48連接的多泛素化，導(dǎo)致其經(jīng)蛋白酶體途徑降解。這種G9a介導(dǎo)的FoxO3a降解促進了氧化應(yīng)激、NLRP3炎癥小體激活和細胞焦亡。重要的是，使用BIX-01294藥理學(xué)抑制G9a或過表達FoxO3a均顯著改善了糖尿病RIRI。本研究揭示了糖尿病RIRI中存在一種新型的G9a-TRIM21-FoxO3a調(diào)控軸，其中G9a介導(dǎo)的甲基化許可了FoxO3a的泛素化和降解，從而促進細胞焦亡和氧化應(yīng)激。這些發(fā)現(xiàn)表明G9a是預(yù)防或治療糖尿病腎缺血再灌注損傷的潛在治療靶點。
圖：DM加劇RIRI并上調(diào)G9a表達
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